含有融合标记基因和LoxP／FRT位点的植物表达载体构建及应用

• 作者: 朱友银 田晓娥 赵德刚
• 来源期刊: 基因组学与应用生物学
• 学科: 生物学
• 关键词: 融合筛选标记 Bar gus 融合重组酶位点 LoxP/FRT 植物遗传转化
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 257-264
• 分类号: Q943.2
• 字数: 4333字
• 语种: 中文

摘要

本研究利用化学合成法合成了包含pCAMBIA0390左右边界T-DNA和LoxP／FRT（LF）位点的DNA片段Ⅰ，利用SacⅡ和SphⅠ酶切位点，去除了pCAMBIA0390左右边界T—DNA和多克隆位点之间的序列，然后连接DNA片段Ⅰ和载体片段，构建了植物表达载体pGM323-LF-enTP。随后，再合成含有适合在单予叶植物中表达的由玉米Ubi-1启动子驱动的融合标记基因（Bar：：gus）和水稻actin-1启动子驱动的助抗虫蛋白基因（Cry1A6）表达元件的DNA片段Ⅳ，在pGM323～LF—enTP的基础上，利用5以Ⅰ和PstⅠ位点构建了同时含有LF位点、Bar：：gus以及Cry1Ab基因表达元件的表达载体pGM626-LF—ABt。利用含有pGM626-LF—ABt的农杆菌遗传转化烟草和玉米，以草丁膦作为抗性筛选剂，非转化细胞得到了有效抑制，快速获得了转基W植株，利用GUS组织化学检测和RT—PCR分析了转基因植株中标记基因的表达，结果表明pGM626-LF—ABt可以用于农杆菌介导的单、双子叶植物遗传转化。本研究为培育安全抗虫转基因植物奠定了基础。