不含POU结构域的八聚核苷酸结合蛋白(NONO)真核表达载体的构建及其细胞内定位

• 作者: 刘爱华 吴翠玲 姜勇 张秀娟 王娟
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 血凝素类 基因表达 重组融合蛋白质类
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 365-367
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 构建小鼠的不包含POU结构域的八聚核苷酸结合蛋白(NONO)真核表达载体,并观察其在NIH3T3细胞中的表达和定位.方法 提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT- PCR扩增得到NONO编码序列,将该序列克隆至带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,构建质粒pcDNA3-NONO-HA.通过PCR、双酶切鉴定构建正确后以脂质体为媒介转染NIH3T3细胞,采用荧光显微镜观察该融合蛋白在细胞内的表达及定位情况.结果 重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明构建正确,且能在NIH3T3细胞中得到大量表达.荧光显微镜观察发现NONO-HA融合蛋白在静息状态下主要分布于胞质中.结论 成功构建带HA标签的NONO真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达NONO-HA融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘爱华	广州南方医科大学南方医院呼吸科	1	1	1.0	1.0