小鼠膜联蛋白A1真核表达载体的构建及其细胞内定位

• 作者: 刘爱华 刘芸 姚琦 姜勇 邓鹏
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 膜联蛋白A1 小鼠 遗传载体 转染
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1308-1310
• 页数: 3页
• 分类号: Q291
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.11.011

摘要

目的 构建小鼠膜联蛋白A1(annexin-A1,ANXA1)真核表达载体,并检测其在NIH3T3细胞中的表达和定位.方法 采用PCR法从小鼠肝cDNA文库扩增ANXA1基因编码序列,并将其克隆至带有血凝素(HA)标记的真核表达载体pcDNA3-HA上,经PCR、酶切和测序鉴定后,将重组质粒pcDNA3-HA-ANXA1瞬时转染NIH3T3细胞,采用细胞免疫荧光法检测目的 基因表达情况.结果 菌液PCR、双酶切和DNA测序结果均表明重组质粒pcDNA3-HA-ANXA1构建正确,并可在NIH3T3细胞的胞质、胞核和胞膜中广泛表达.结论 成功构建了pcDNA3-HA-ANXA1真核表达载体,该载体中的HA-ANXA1融合基因能在哺乳动物中有效表达并正确定位,为下一步深入研究ANXAl相关的信号通路奠定了基础.