转甲状腺素蛋白真核表达载体的构建及其细胞内定位

• 作者: 夏高晓 姜勇 孙明晶 胡水旺 赵明哲 陈丽
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 前白蛋白 克隆,分子 基因表达
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 722-724
• 页数: 3页
• 分类号: Q51|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.06.021

摘要

目的 构建转甲状腺素蛋白(TTR)的真核表达载体,观察其在NIH 3T3细胞中的表达及定位.方法 提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到TTR编码序列,将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,构建质粒pcDNA3-TTR-HA.重组质粒通过PCR、酶切测序等证明构建正确后经脂质体转染NIH 3T3细胞,固定并染色后通过荧光显微镜观察该融合蛋白的表达及定位.结果 重组质粒经鉴定证明构建正确.转染实验发现,该质粒能够在NIH 3T3细胞中表达,表达产物主要分布在细胞质中.结论 成功构建带HA标签的TTR真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为深入研究TTR在细胞内的相关生物学功能奠定了基础.