小鼠ATP酶β亚单位真核表达载体的构建和细胞内定位研究

• 作者: 冯国开 刘爱华 史晓兰 姜勇
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺苷三磷酸酶,β亚基 遗传载体 蛋白定位
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 249-253
• 分类号: R349.18
• 语种: 中文

摘要

目的 构建小鼠ATP酶β亚单位(ATPaseβ)真核表达载体,并观察其在哺乳动物细胞中的表达定位情况.方法 取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增得到ATPaseβ编码序列,将其连接到pMD18-T载体上,然后以pMD18-ATPaseβ为模板扩增得到ATPaseβ编码序列,再将其克隆到真核表达载体pcDNA3/HA上.采用脂质体转染法转染NIH 3T3细胞及293细胞,在荧光显微镜下观察结果.结果 PCR、双酶切和测序结果表明,重组质粒pcDNA3/HA-ATPaseβ构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH 3T3细胞中表达,表达产物主要定位于细胞质,细胞膜上也有表达,而在293细胞中只表达于细胞质.结论 成功构建了带有HA标签的小鼠ATPaseβ真核表达载体,该载体能够在哺乳动物NIH 3T3及293细胞中有效表达并正确定位,为进一步研究ATPaseβ的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘爱华	南方医科大学南方医院呼吸科	31	165	8.0	11.0