小鼠GITR真核表达载体的构建及表达

• 作者: 刘艳 刘青玲 朱晨露 沈培 王胜军 田洁 苏兆亮 许化溪 赵银霞 郑东 马斌 马洁
• 来源期刊: 江苏大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: mGITR 真核表达 转染 COS-7 细胞
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 329-332
• 分类号: R393
• 字数: 2600字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2011.04.013

摘要

目的:构建小鼠GITR(mGITR)的真核表达载体,转染COS-7 细胞表达小鼠GITR 蛋白.方法:用TRIzol 试剂抽提小鼠脾细胞总RNA,经RT-PCR 扩增出GITR 全长基因,构建真核重组载体pIRES2-EGFP-mGITR,经鉴定后采用脂质体介导DNA 法转染COS-7 细胞.结果:从小鼠脾细胞中成功扩增得到GITR 全长基因.重组载体pIRES2-EGFP-mGITR 转染COS-7 细胞后,经荧光显微镜观察可见绿色荧光,提取蛋白后经蛋白质印迹鉴定有目的蛋白mGITR.结论:成功构建了小鼠GITR 基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-mGITR,转染COS-7细胞后mGITR蛋白获得成功表达.