PrP(D178N)无细胞表达、抗原性及结构分析

• 作者: 万家余 刘文森 孟轲音 张晓晶 李忠义 李莎 汤鑫 郝镯 鞠传静
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 朊蛋白 突变 无细胞表达
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1042-1045
• 分类号: R373.9|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 无细胞表达人178位点突变朊蛋白PrP(D178N),并分析其抗原性及结构.方法 提取人血液基因组DNA,应用PCR法突变人PrP 178号位点.以正常的PrP为对照组,分别连接至真核表达载体pcDNA3.1上,利用无细胞真核表达系统进行表达.Western blot分析表达的重组蛋白的抗原性,电镜观察抗原结构.结果 突变基因重组表达质粒构建正确；表达的PrP( D178N)蛋白相对分子质量约为28 000,对PK酶具有抗性,电镜下可见氧病相关纤维(Scrapie associated fibrils,SAF)存在.结论 已成功无细胞表达了 PrP(D178N),为后续其突变后空间构象及致病机理的研究奠定了基础.