双顺反子表达载体DV的构建及其表达效率

• 作者: 于湘晖 刘晨露 夏秋 孔维 张丽星 张喜珍 张海红 王玉倩
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 双顺反子 启动效率 CMV启动子 luciferase报告基因
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1016-1021
• 分类号: Q782
• 语种: 中文

摘要

目的 构建双顺反子表达载体DV,并检测其表达效率.方法 以载体VR1012为模板,PCR扩增BGH基因和启动子CMV-intronA基因片段,分别连接至载体VR1012启动子和终止子之间的相应位点上,构建双顺反子表达载体DV.另以质粒pshuttle-luciferase为模板,PCR扩增报告基因luciferase片段,分别连接至DV的两个启动子后,得到质粒DV-luc1和DVluc2.将质粒DV-luc1、DV-luc2和阳性质粒pshuttle-luciferase分别转染COS-7细胞,Western blot检测lucfferase蛋白的表达情况,荧光酶标仪检测luciferase降解底物的水平.结果 双顺反子表达载体DV经双酶切鉴定证明构建正确；转染重组质粒DV-luc1和DV-luc2的COS-7细胞中均有luciferase的表达,且表达效率DV-luc2略高于DV-luc1.结论 已成功构建了双顺反子表达载体DV,且载体的第2个启动子的启动效率略高于第1个启动子,为基因治疗、转录调控、多价疫苗等的研究奠定了基础.