EGF和IGF-1受体特异性siRNA真核表达载体的设计、构建及鉴定

• 作者: 刘业军 周绪红 张岑 方文敏 李卓先 王蕾 袁玉林
• 来源期刊: 咸宁学院学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 小干扰RNA 表皮生长因子受体 胰岛素样生长因子受体 鼻咽癌细胞系
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 382-386
• 分类号: Q78
• 字数: 4011字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0635.2011.05.007

摘要

目的 构建能表达靶向EGF RmRNA 和IGF-1 RmRNA的siRNA真核表达质粒.方法 从GeneBank 中搜索EGFR(NM 000875)和IGF-1 R(NM 201283)基因组标准序列,根椐siRNA设计原理各基因选取两段19bp的碱基序列作为靶目标,并根据其序列构建真核表达质粒.随机选取一段与人类基因无同源性的碱基序列,构建表达siRNA的真核表达质粒作为质粒对照psiPC.转染后分别培养12h、24h、36h、48h、60h、72h,以转染率高的时间点的鼻咽癌细胞做流式细胞仪检测转染率,并采用共聚焦显微镜检测质粒绿色荧光蛋白的表达.结果 质粒psiEGFR1、psiEGFR2、psiIGF-1 R1、psiIGF-1 R2和psiPC酶切后均可见400bp小带,与预期插入的目的 基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;经荧光显微镜下摄片计算转染效率发现:在转染48h达最高(55%~60%之间);流式细胞仪检测转染后48h的转染率为57.45%,共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达绿色荧光.结论 本实验构建了靶向EGFRmRNA和IGF-1 RmRNA、表达短发夹RNA (shRNA)的真核表达质粒.重组质粒能有效转染人鼻咽癌细胞并在其中表达,能下调鼻咽癌细胞EGFR和IGF-1 R的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王蕾	武汉大学基础医学院人体解剖学教研室	42	98	6.0	8.0
2	袁玉林	武汉大学基础医学院人体解剖学教研室	49	130	7.0	8.0
3	周绪红	武汉大学基础医学院人体解剖学教研室	48	210	9.0	11.0
4	李卓先	武汉大学基础医学院人体解剖学教研室	3	1	1.0	1.0
5	方文敏	武汉大学基础医学院人体解剖学教研室	5	3	1.0	1.0
6	张岑	武汉大学基础医学院人体解剖学教研室	3	11	2.0	3.0
7	刘业军	武汉大学基础医学院人体解剖学教研室	1	0	0.0	0.0