犬干扰素α1基因的修饰及在毕赤酵母中的表达

• 作者: 朱艳平 王玉 郭霄峰
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 干扰素α 犬 基因修饰 毕赤酵母 基因表达 抗病毒活性
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1064-1067
• 分类号: Q511|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 修饰犬干扰素α1(Canine interferon alpha1,CaIFNα1)基因,提高其在毕赤酵母中的表达水平及抗病毒活性.方法 根据巴斯德毕赤酵母表达系统对密码子的偏爱性,将CaIFNα1基因改造后,克隆至分泌表达载体pPICZαC中,电转化巴斯德毕赤酵母X33,甲醇诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定和氨基酸测序后,检测重组蛋白的表达量及抗水疱性口炎病毒( Vesicular stomatitis virus,VSV)的活性.结果 重组表达质粒pPICZαC-CaIFNα1经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组CaIFNα1蛋白相对分子质量约为24 000,蛋白氨基酸序列与天然的CaIFNα1氨基酸序列相同,3批重组酵母菌表达产物的蛋白含量分别为0.253、0.198和0.224 mg/ml,在Vero细胞上均无抗VSV活性,在MDCK细胞上的抗VSV活性分别为1.58×108、1.30× 108和1.50× 108U/mg.结论 已成功改造了CaIFNα1基因,并在毕赤酵母中实现了高效表达,为大量发酵生产干扰素奠定了基础.