miRNA"海绵"重组质粒的构建及对miR-483-5p的敲减

• 作者: 乔瑜 周凌云 惠洋 李福源 王曦迪 邹朝霞 马宁 高旭
• 来源期刊: 哈尔滨医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: miRNA海绵 miR-483-5p 敲减
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 1-4
• 分类号: Q78
• 字数: 2232字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1905.2011.01.001

摘要

目的 建立microRNA失功能(loss of function)研究模型,为功能研究提供实验材料.方法 针对miR-483-5p成熟体序列设计含6个拷贝反义序列的DNA片段,称为"S-483",将其连接入含CAG启动子的pCAGGs载体中,构建pCAGGs-S-483重组质粒.利用脂质体技术瞬时转染Hep1-6细胞,经real-time PCR对成熟miR-483-5p含量进行检测.结果 转染pCAGGs-S-483组miRNA-483含量(0.33±0.04)较转染空质粒组(1.00明显下降(P＜0.01),但对其它miRNAs无影响.结论 S-483海绵策略可有效"吸附"并降低miR-483-5p,成功构建了pCAGGs-S-483重组质粒,为其功能研究和miRNA敲减动物的建立提供了有益借鉴.