日本血吸虫Toll样受体相互作用蛋白基因的克隆表达及鉴定

• 作者: 冯正 徐斌 王小宁 王晓娜 胡薇
• 来源期刊: 中国血吸虫病防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 Toll样受体相互作用蛋白 虫期特异性 克隆 表达 鉴定
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 406-411
• 分类号: R383.24
• 字数: 4370字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-6661.2011.04.014

摘要

目的 克隆、表达日本血吸虫Toll样受体相互作用蛋白(SjTollip)基因,并研究该基因在日本血吸虫各虫期的转录表达情况.方法 从日本血吸虫cDNA文库中挑出Toll样受体相互作用蛋白基因进行体外扩增,并克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物.制备日本血吸虫各虫期阶段总RNA和重组SjTollip蛋白免疫新西兰白兔的免疫兔血清,利用RT-PCR和蛋白质免疫印迹分析SjTollip基因在日本血吸虫各期转录表达的差异及重组SjTollip蛋白的免疫原性.结果 构建了重组原核表达载体SjTollip/pET-28a,诱导获得以包涵体形式表达的不可溶重组蛋白,相对分子质量约为24000,与预测的融合蛋白相对分子质量相符.纯化后的重组蛋白rSjTollip可被日本血吸虫感染兔血清识别.虫期转录特异性分析显示,该基因在尾蚴和雄虫中转录水平较低.免疫印迹分析结果显示,在虫卵、尾蚴、童虫、雄虫、雌虫各发育阶段都检测到该蛋白,但童虫和雌虫中表达水平明显升高.结论 SjTollip基因在日本血吸虫各发育阶段转录表达水平有较大差异,其有可能成为潜在的日本血吸虫病疫苗候选抗原和药物及诊断靶点.