新型抗uPAR人源化抗体的表达和活性检测

• 作者: 孙梦梅 张部昌 曹诚 李平 靳彦文
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 受体 尿纤溶酶原激活物 人源化抗体 瞬时表达
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 258-261
• 分类号: Q785
• 字数: 4030字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2011.04.005

摘要

目的 制备抗尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)人源化抗体并初步检测它们与抗原的亲和能力.方法 通过计算机辅助设计的结果,合成新型抗uPAR抗体的轻链和重链可变区基因序列,通过重叠PCR方法,拼接成完整的轻链和重链基因并克隆入pIRES双向表达载体.瞬时转染293T细胞,收取细胞上清,rProtein A亲和层析法纯化目的 抗体,并进行SDS-PAGE和免疫印迹鉴定,采用Biacore3000技术检测抗体与抗原的结合能力.结果 成功构建5种表达载体S1～S5,纯化的抗体在还原SDS-PAGE中表现为相对分子质量约为25×103和55×103两条带;免疫印迹分析表明,该人源化抗体可与羊抗人IgG特异性结合.Biacore3000实验结果表明,S2、S4和S5抗体与抗原具有良好的亲和活性,且素和活性分别为1.74×10-8,1.49×10-8和1.05×10-8 mol/L.结论 成功构建并表达了5种抗uPAR人源化抗体,其中S2、S4和S5具有良好的抗原结合能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹诚	军事医学科学院生物工程研究所	112	536	10.0	19.0
2	李平	军事医学科学院生物工程研究所	63	162	6.0	9.0
3	张部昌	安徽大学生命科学学院	82	550	12.0	20.0
4	孙梦梅	安徽大学生命科学学院	2	2	1.0	1.0
8	靳彦文	军事医学科学院生物工程研究所	15	90	6.0	9.0