14-3-3σ干扰逆转录病毒载体的构建及其稳定转染HaCat细胞系的建立

• 作者: 丁振华 周美娟
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 14-3-3σ 逆转录病毒 稳定转染的HaCat细胞系
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1601-1604
• 分类号: Q75|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建14-3-3σ干扰逆转录病毒载体,建立稳定转染的HaCat细胞系.方法:人工合成14-3-3σ基因干扰序列并定向插入到pSuper-retro-neo-EGFP质粒,并在STBL3菌内进行质粒扩增,刷选阳性克隆,酶切测序鉴定,转染293FT细胞进行病毒包装、扩增、纯化、获取逆转录病毒载体,将逆转录病毒栽体感染HaCat细胞后Western免疫印迹法、Real-time PCR法检测14-3-3σ的表达情况.结果:连接重组后经酶切和测序筛选出pSuper-retro-neo-EGFP-si14-3-3σ;干扰质粒稳定转染的HaCat细胞系在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光,Western免疫印迹法和Real-time PCR法表明14-3-3σ表达明显抑制.结论:成功构建了14-3-3σ干扰的逆转录病毒载体,并构建了其稳定转染的HaCat细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁振华	南方医科大学公共卫生与热带医学学院放射医学系	70	187	8.0	9.0
2	周美娟	南方医科大学公共卫生与热带医学学院放射医学系	45	150	7.0	10.0