乙酰氨基半乳糖转移酶14(GALNT14)在毕赤酵母中的表达纯化及活性鉴定

• 作者: 刘晓波 刘芳铭 吴琛 张博 张晓康 李秦剑 王媛媛 田焕娜 葛建峰 马思思
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: GALNT14 毕赤酵母 分泌表达 纯化 活性测定
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 58-63
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

将GALNT14全长编码区克隆到分泌型酵母表达载体pPIC9K中,构建重组载体pPIC9KT14,经电转至毕赤酵母GS115中表达,使用G418筛选高表达重组菌,并对诱导条件进行优化,表达产物使用SDS-PAGE分析、Western blot鉴定、Sephadex G-100纯化、最后经HPLC检测活性.结果显示,在提供更好的供氧量条件下,用0.75％甲醇诱导可提高目的蛋白的表达量而降低杂蛋白的表达.培养上清液经SDS-PAGE检测显示目的蛋白分子量约64 kDa；Western blot结果显示在相应分子量处有一条特异性条带；利用Sephadex G-100成功分离纯化了目的蛋白；活性测定结果显示所获得的目的蛋白具有催化活性,为深入研究GALNT14的结构与功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴琛	河北大学生命科学学院	19	121	5.0	10.0
2	张博	河北大学生命科学学院	26	52	4.0	6.0
3	王媛媛	河北大学生命科学学院	11	12	3.0	3.0
4	葛建峰	河北大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
5	马思思	河北大学药学院	1	0	0.0	0.0
6	刘芳铭	河北大学生命科学学院	2	3	1.0	1.0
7	田焕娜	河北大学生命科学学院	3	3	1.0	1.0
8	刘晓波	河北大学药学院	2	0	0.0	0.0
9	张晓康	河北大学生命科学学院	2	3	1.0	1.0