靶向 STAT5的RNAi重组质粒的构建与鉴定

• 作者: 单保恩 张丽杰 赵振军 鹿刚
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 信号转导及转录激活因子5 RNA干扰 SMMC7721细胞株
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 199-201
• 页数: 3页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文

摘要

目的 构建靶向信号转导及转录激活因子5(STATS)的RNAi重组质粒并进行鉴定.方法 设计针对STAT5编码区的有短发夹结构的3对DNA序列,克隆到质粒栽体Pgenesil-1中构建重组质粒,再对其进行酶切鉴定、DNA测序分析.脂质体法转染重组质粒至SMMC7721细胞株中,western-blot、RT-PCR检测STATS基因表达.结果 酶切鉴定和测序分析提示,靶向STAT5的RNAi重组质粒构建成功,3条靶向STATS的序列特异性小发夹状RNA(shRNA)可有效抑制SMMC7721细胞STATS表达,mRNA表达抑制率分别为70.43%、43.02%、45.07%,蛋白质表达抑制率分别为67.45%、37.36%、41.86%(P<0.05).其中以Pgenesil-1-STAT5Al抑制效应最强.结果 成功构建靶向STATS的RNAi重组质粒,为进一步用该重组干扰栽体进行体内肿瘤基因治疗的研究奠定了基础.