靶向c-Met的shRNA重组质粒的构建及生物活性鉴定

• 作者: 姬长友 谢治年 陈继川
• 来源期刊: 中国耳鼻咽喉头颈外科
• 学科: 医学
• 关键词: 喉肿瘤 RNA干扰 原癌基因蛋白质c-Met
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 251-254
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 3710字
• 语种: 中文

摘要

目的 设计以人c-Met基因为靶向的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),构建携带此shRNA的重组质粒,检测其抑制c-Met mRNA及蛋白表达的效应,筛选RNAi作用最强的shRNA片段.方法 设计3对针对c-Met基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA的重组质粒pSilencer 2.0/c-Met-shRNA,通过脂质体介导的方法将其转染到喉癌Hep-2细胞株中.采用RT-PCR及Western-Blot法检测c-Met mRNA及蛋白表达情况,比较转染前后其表达的变化,判断各shRNA的干扰效应.结果 经测序,模板序列与设计序列完全正确,经过RT-PCR及Western-Blot法检测,转染干扰质粒后,c-Met基因的mRNA水平及蛋白表达水平均下调,以重组质粒pSilencer 2.0/c-Met-shRNA2效应最显著.结论 成功构建了针对c-Met基因的重组RNAi质粒,为下一步探讨c-Met基因对喉癌Hep-2细胞的生物学行为的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姬长友	第三军医大学大坪医院野战外科研究所耳鼻咽喉头颈外科	31	95	6.0	8.0
2	陈继川	第三军医大学大坪医院野战外科研究所耳鼻咽喉头颈外科	18	30	3.0	3.0
3	谢治年	第三军医大学大坪医院野战外科研究所耳鼻咽喉头颈外科	1	0	0.0	0.0