人源MAP3K7克隆及其GST融合蛋白的表达和鉴定

• 作者: 冯艳玲 刘彩红 朱亚勤
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人MAP3K7基因 基因克隆 融合蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 688-690
• 分类号: Q291
• 字数: 2083字
• 语种: 中文
• DOI: 21-1227/R.20110726.1659.025

摘要

目的 构建MAP3K7蛋白GST的融合表达载体,高效表达和纯化GST-MAP3K7融合蛋白,为GST Pulldown实验做准备.方法 通过PCR扩增MAP3K7全长编码基因,经双酶切定向克隆至表达载体pGEX-5X-1,构建原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,通过酶切和测序鉴定后,导入E.coli BL21宿主菌中,IPTG诱导表达融合蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖凝胶纯化表达产物,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定.结果 经测序鉴定成功构建了原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,诱导后的GST融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot检测到分子量正确的特异性蛋白条带,经纯化后,得到了高纯度的融合蛋白.结论成功构建了MAP3K7全长的GST重组表达载体,确定了GST-MAP3K7融合蛋白表达的最佳条件,诱导成功并得到了高纯度的融合蛋白,为进一步研究MAP3K7蛋白的生物学功能奠定了基础.