霍乱弧菌外膜蛋白W的原核表达及抗原性分析

• 作者: 何君 左庭婷 朱虹 李岩伟 李建华 王忠田 端青 韩雪莲
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 外膜蛋白W 霍乱弧菌 原核表达 抗原性
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 746-748,753
• 分类号: R378.3
• 字数: 3217字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2011.10.007

摘要

目的 在大肠杆菌中表达霍乱弧菌种特异性外膜蛋白(Omp)W,纯化后制备检测用OmpW抗体.方法 采用PCR法以霍乱弧菌基因组为模板扩增ompW基因,插入表达载体pET-32a( + )的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-32a-ompW;重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选阳性重组菌株,经IPTG诱导获得目的 蛋白,纯化后免疫新西兰大耳白兔,制备OmpW的多克隆抗体并进行鉴定.结果 扩增得到ompW基因片段,并成功构建pET-32a-ompW原核表达系统,重组蛋白OmpW以包涵体形式高效表达;制备的OmpW抗体能与天然的O1群和O139群霍乱弧菌结合.结论 霍乱弧菌OmpW可由原核系统高效表达,免疫获得的抗体具有较好的效价,为进一步制备霍乱弧菌检测用抗体奠定基础.