PTEN 基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 徐中华 钱永跃 钱海鑫
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒载体 PTEN 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 87-89
• 分类号: R734.2
• 语种: 中文

摘要

目的 构建含 PTEN 基因的重组腺病毒载体,为 PTEN 进行肺腺癌的基因治疗奠定基础.方法 用PTEN 引物 VT415 和 VT416 扩增 PTEN 基因后,分别用EcoR I+Sal I双酶切PCR-PTEN和PSUCMV,回收并纯化PTEN cDNA小片断和PSUCMV的大片断,使两者连接获得含有PTEN基因的重组穿梭质粒载体PSUCMV-PTEN;采用细胞内同源重组方法构建PTEN基因重组腺病毒载体,将质粒PSUCMV-PTEN与含有5型腺病毒右臂的质粒Pbghe3通过 Lipofectamine 2000共转染至293细胞,经PCR鉴定,扩增病毒,氯化铯密度梯度离心法纯化浓缩,测定病毒滴度.结果 经双酶切和PCR进行鉴定,经鉴定正确的腺病毒命名为VSUCMV-PTEN,TCID50法测定病毒滴度为1.0×1010pfu/ml.结论 成功构建了含PTEN基因的重组腺病毒载体Ad-PTEN,为下一步体内外实验证实PTEN对肺癌的抑制作用研究打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱海鑫	苏州大学附属第一医院普外科	228	836	13.0	16.0
2	钱永跃	苏州大学附属第二医院胸心外科	86	493	14.0	18.0
3	徐中华	苏州大学附属第二医院胸心外科	48	249	10.0	14.0