PRRSV河南株ORF7基因的克隆表达及条件优化

• 作者: 乔松林 刘明 刘运超 史西保 张改平 游雷鸣 王丽 王爱萍 肖治军 郭军庆
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征 反转录 克隆 表达 Western-blot 美洲型
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 136-140
• 分类号: S852.65
• 字数: 3297字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3268.2011.01.035

摘要

从猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)河南分离株(HN07-1、HN07-2)的细胞培养物中提取RNA,根据参考株IAF-exp91 N蛋白基因序列设计出2对引物,成功克隆出ORF7全长基因,并连接至pMD-19T栽体.基因测序结果表明,2株PRRSV河南分离株ORF7基因序列完全相同;该序列与HB-4(hs)同源性为100%,与标准美洲株VR-2332和我国早期分离的BJ-4株同源性为93.8%.将该基因亚克隆到原核表达栽体pGEX-6p-1后,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达条件进行优化.SDS-PAGE和Western-blot结果表明,成功表达了约40kD的融合蛋白;使用1.0mmol/L的IPTG在2×YT培养基中诱导8h可获得最大表达量.