fat-1基因密码子优化及在家兔胎儿成纤维细胞中的初步表达

• 作者: 华绪川 周红梅 张立凡 徐宁迎 王争光 王颖 郭晓令
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: fat-1基因 密码子优化 转染 家兔胎儿成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 329-336
• 分类号: S829.1
• 字数: 6316字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2011.02.017

摘要

根据家兔基因密码子使用偏好性,对引自GenBank的秀丽隐杆线虫fat-1基因编码序列进行密码子优化,通过全基因合成的方法获得优化后的fat-1基因(命名为opfat-1);从秀丽隐杆线虫中RT-PCR扩增获得fat-1.将扩增的fat-1和合成的opfat-1基因分别构建到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1中.采用脂质体LipofectamineTM转染法将fat-1和opfat-1基因转入家兔胎儿成纤维细胞(Rabbit fetal fibroblast cells,rFFCs)中.对比不同DNA和转染试剂用量以及细胞暴露于DNA、转染试剂中作用时间探讨影响rFFCs转染效率的参数,经过优化,最优的rFFCs转染条件为:LipofectamineTM用量2～3μl,DNA量0.8～1.0μg,LipofectamineTM与DNA、细胞共培养时间为8 h.通过绿色荧光标记和RT-PCR检测转染细胞中融合蛋白和目的基因的表达.密码子优化的opfat-1与fat-1相比,体外瞬时表达效率有极为显著的提高;G418抗性筛选获得转基因单克隆细胞,RT-PCR初步验证fat-1和opfat-1基因均在家兔胎儿成纤维细胞中稳定转录表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐宁迎	浙江大学动物科学学院	147	1170	18.0	27.0
2	华绪川	浙江大学动物科学学院	6	15	2.0	3.0
3	王颖	浙江大学动物科学学院	60	354	9.0	17.0
4	郭晓令	浙江大学动物科学学院	36	267	9.0	15.0
5	王争光	浙江大学动物科学学院	24	85	5.0	8.0
6	张立凡	浙江大学动物科学学院	13	57	6.0	7.0
7	周红梅	浙江大学动物科学学院	7	38	3.0	6.0