大肠杆菌甘露糖-6-磷酸异构酶基因(manA/pmi)的克隆及功能鉴定

• 作者: 吴家和 杨欣 梁爱华 罗晓丽
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 甘露糖-6-磷酸异构酶 大肠杆菌 果糖 选择标记
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 107-110
• 分类号: Q785
• 字数: 3584字
• 语种: 中文

摘要

甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi/manA)是当前植物转基因工程的重要选择标记基因,在生物安全上被认为是无害的.根据同源序列从大肠杆菌DH10B基因组中克隆出pmi基因.通过诱导原核表达获得PMI目的蛋白,对粗提和经过镍柱纯化的PMI蛋白进行Western分析和酶活反应鉴定.以上结果表明,PMI蛋白成功诱导,其分子量为46kDa,纯化过的PMI具有高的酶活性,能催化甘露糖-6-磷酸发生异构反应生成果糖-6-磷酸.同时利用pmi基因作为选择基因构建植物表达载体pCPMi,通过农杆菌介导法转化烟草获得转基因植株,PCR检测结果表明96个再生植株有72株为阳性.以上结果表明,克隆的pmni基因具有高的酶活性,并能作为转基因植物的一种选择标记,同时也为转基因植物提供安全的选择标记基因,便于转基因植物的推广.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨欣	中国科学院微生物研究所植物基因组学国家重点实验室	11	116	5.0	10.0
3	吴家和	中国科学院微生物研究所植物基因组学国家重点实验室	29	207	8.0	12.0
5	梁爱华	山西大学生物技术研究所	97	555	13.0	18.0
8	罗晓丽	山西省农业科学院棉花研究所	31	443	11.0	20.0