构建survivin shRNA重组载体及靶向下调PC3细胞survivin mRNA的表达

• 作者: 何敏 卢雪梅 庄俊华 徐建华 朱家勇 金小宝 陈丹娜 黄宪章 黎美贤
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 短发夹RNA survivin 基因 前列腺癌细胞 载体 凋亡 组织构建
• 年，卷（期）: 2011,（41）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7738-7741
• 分类号: R318
• 字数: 4326字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.41.034

摘要

背景:survivin 基因特异性表达于肿瘤和胚胎组织,与肿瘤细胞的分化增殖、浸润转移以及多药耐药密切相关.目的:构建靶向survivin 基因的shRNA 重组质粒表达载体,转染前列腺癌细胞PC3,验证该载体能否下调细胞survivin 基因mRNA 水平.方法:以survivin 基因为靶点设计具有短发夹结构的shRNA 序列,经退火成互补双链后克隆入pENTR/U6 建立重组表达载体pENTR/U6-SUR ;转化E.coli TOP10 菌株,挑取阳性菌落进行菌落PCR 和测序鉴定;将重组质粒转染前列腺癌细胞株PC3 细胞,RT-PCR 检测重组质粒对细胞survivin 基因mRNA 水平的抑制效果.结果与结论:将设计合成的shRNA 序列经退火后克隆至pENTR/U6 载体中,菌落PCR 可扩增出目的条带,测序结果证实插入片段为所需序列;pENTR/U6-SUR 重组质粒转染后PC3 细胞survivin 基因mRNA 表达水平显著下降,且24 h 比48 h 作用更明显.成功构建了靶向survivin 基因的shRNA 质粒表达载体,并证实该载体显著下调了PC3 细胞中survivin 基因mRNA 水平.