内蒙古白绒山羊VEGF164基因毛囊特异性表达载体的构建及胎儿成纤维细胞的稳定转染

• 作者: 侯鑫 刘东军 刘俊娥 李彬 王志钢 郭旭东 鲍文蕾
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 内蒙古白绒山羊 VEGF 毛囊特异性表达载体 稳定转染
• 年，卷（期）: 2011,（22）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 4756-4762
• 分类号: S827
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.22.025

摘要

[目的]构建绒山羊血管内皮生长因子164 (vascular endothelial growth factor 164,VEGF164)基因的毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞,筛选获得稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164并可用于核移植的转基因细胞克隆.[方法]以pCDsRed2载体为基本骨架将VEGF164基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,接续连接红色荧光蛋白表达元件,构建VEGF164基因毛囊特异表达载体pCDsRed2-KV (6.3 kb).外源表达载体以lipofectamine TM 2000介导转染胎儿成纤维细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆.PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合.[结果]在构建的表达载体pCDsRed2-KV中,VEGF164基因被正确连接在毛囊特异性启动子KAP6-1下游,基因下游按顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因；外源KAP6-1启动子和VEGF164基因整合到细胞基因组中.[结论]成功构建稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164的真核表达载体,稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,为下一步通过克隆技术获得转VEGF164基因绒山羊提供了条件.