牛乳铁蛋白肽基因LfcinB的慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 何晓光 张文晓 张晓宇 王巍 秦宜德 郑欣
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 乳铁蛋白 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 709-712
• 分类号: R341|R394.2
• 字数: 3250字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2011.07.028

摘要

目的 构建并鉴定牛乳铁蛋白肽基因LfcinB基因的慢病毒载体,为LfcinB应用于基因治疗奠定了基础,以便进一步研究LfcinB的功能.方法 根据GenBank报道的LfcinB基因序列,合成LfcinB基因,PCR方法扩增LfcinB基因,与经EcoR 1和Nhe 1酶切后的pljm1载体[含CMV启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接、转化,产生pljm1-LfcinB慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用pljm1-LfcinB载体、△8.91载体、pvsvg载体三质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生重组慢病毒,以293T细胞中绿色荧光蛋白GFP的表达水平测定病毒滴度.Western blot检测LfcinB的表达.结果 PCR和测序证实成功构建了pljm1-LfcinB慢病毒载体.浓缩病毒悬液滴度为2×108 TU/ML.Western blot检测到目的肽成功表达.结论 成功构建含LfcinB的慢病毒载体,为进一步感染细胞和基因治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦宜德	安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室	70	493	11.0	19.0
2	张晓宇	安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室	1	5	1.0	1.0
3	张文晓	安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室	4	23	3.0	4.0
4	郑欣	安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室	4	32	4.0	4.0
5	何晓光	安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室	4	32	4.0	4.0
6	王巍	安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室	6	28	3.0	5.0