EGFL7基因RNAi重组慢病毒的构建及其对喉癌细胞侵袭的抑制

• 作者: 姚小宝 嵇宪生 朱宏亮 李蕾 王晓侠 陈菁华
• 来源期刊: 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 EGFL7 喉肿瘤 慢病毒属
• 年，卷（期）: 2011,（24）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1135-1138,1141
• 分类号: R739.65
• 字数: 4165字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1781.2011.24.010

摘要

目的:构建类表皮生长因子域7( EGFL7)基因RNA干扰(RNAi)重组慢病毒,观察其对喉癌体外侵袭的抑制作用.方法:筛选确定的EGFL7基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,与含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)的pLV载体连接产生LV-sh EGFL7慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用重组慢病毒体外转导喉癌细胞,Western blot法检测喉癌细胞EGFL7蛋白表达.Boyden侵袭小室法实验观察转导shRNA后的喉癌细胞侵袭能力的变化.利用克隆形成实验检测EGFL7基因沉默对Hep-2细胞集落形成能力的影响.结果:成功构建EGFL7的慢病毒载体LV-sh EGFL7,包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为5×108 TU/L.转导siRNA的喉癌细胞EGFL7蛋白表达阴性.EGFL7 siRNA转导后喉癌胞体外侵袭能力下降.EGFL7基因沉默组细胞克隆集落形成率与Hep-2组细胞及空载体组细胞比较,细胞克隆集落形成率显著减低.结论:成功构建人EGFL7基因RNAi慢病毒载体,EGFL7基因沉默对喉癌细胞体外侵袭有明显的抑制作用.沉默EGFL7后,Hep-2细胞集落形成能力显著减低,即下调EGFL7基因表达可在一定程度上抑制喉癌细胞的锚着不依赖性增殖能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚小宝	西安交通大学医学院第一附属医院耳鼻咽喉科	53	189	7.0	10.0
2	王晓侠	西安交通大学医学院第一附属医院耳鼻咽喉科	10	27	4.0	4.0
3	嵇宪生	解放军451医院耳鼻咽喉科	11	34	3.0	5.0
4	朱宏亮	西安交通大学医学院第一附属医院耳鼻咽喉科	31	87	5.0	6.0
5	陈菁华	解放军451医院耳鼻咽喉科	6	12	2.0	3.0
6	李蕾	解放军451医院耳鼻咽喉科	5	11	2.0	3.0