Vero细胞LTR基因的克隆及其DNA定量PCR检测方法的建立

• 作者: 刘景华 吴小红 唐建蓉 曹守春 李加 石磊泰 董关木
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: Vero细胞 基因组DNA 长串联重复序列 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 596-599
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆Vero细胞基因组DNA的长串联重复序列(Long tandem repeats,LTR),并建立vero细胞DNA定量PCR检测方法.方法 提取Vero细胞基因组DNA,经HindⅢ酶切后,克隆至pET-30a(+)载体上,酶切及测序鉴定,并与GenBank中登录的序列进行同源性比较.以172 bp序列为靶基因设计定量PCR引物和Taq探针,建立Vero细胞DNA定量PCR检测方法,并进行特异性验证.结果 经酶切及测序鉴定,共获得8个阳性克隆质粒pET-30a-172,与GenBank中登录的基因序列同源性在98.3%～99.4%之间;建立的Vero细胞DNA定量PCR检测方法的灵敏度可达1×10-6ng/μl,线性范围为1 ng/μl～1 × 10-6ng/μl;以建立的方法检测鸡胚细胞、CHO细胞和地鼠肾细胞DNA,均未见扩增曲线,仅人二倍体细胞(MRC-5)DNA有明显的扩增曲线,表明该法特异性良好.结论 已成功建立了以172 bp LTR为靶基因的Vero细胞DNA定量PCR检测方法,可用于疫苗中Vero细胞DNA残留量的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董关木	中国药品生物制品检定所疫苗一室	87	672	14.0	22.0
2	刘景华	中国药品生物制品检定所疫苗一室	8	59	4.0	7.0
3	吴小红	中国药品生物制品检定所疫苗一室	9	58	4.0	7.0
4	唐建蓉	中国药品生物制品检定所疫苗一室	10	108	5.0	10.0
5	曹守春	中国药品生物制品检定所疫苗一室	5	28	3.0	5.0
6	李加	中国药品生物制品检定所疫苗一室	7	41	4.0	6.0
7	石磊泰	中国药品生物制品检定所疫苗一室	3	9	2.0	3.0