SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测猪细小病毒方法的建立及初步应用

• 作者: 汪明 沈志强 王晓虎 王金良 赵德明 郭显坡
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪细小病毒 实时荧光定量PCR 检测
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 11-15
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank登录的猪细小病毒株NADL-2(NC001718)的VP2基因序列设计1对特异性引物,经PCR扩增出431 bp的目的片段.回收产物与pMD18-T vector连接后转化到基因工程菌DH5α中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定后,作为标准模板建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性试验、特异性试验和重复性试验.结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,R2=0.997 6,产物Tm为82.3～82.9℃,检测灵敏度为72.1拷贝/μL,特异性和重复性良好.本试验所建立的检测PPV VP2基因的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法,为该病毒的致病机制研究、临床早期诊断及定量分析PPV感染程度奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵德明	中国农业大学动物医学院	372	1803	20.0	27.0
2	王金良		154	750	13.0	19.0
3	沈志强		525	1950	18.0	25.0
5	汪明	中国农业大学动物医学院	260	2264	23.0	31.0
8	王晓虎		2	19	1.0	2.0
9	郭显坡		3	49	2.0	3.0