犬MC4R基因原核表达质粒的构建与表达

• 作者: 吕金钢 宋慧娟 巴彩凤 王光川 贺宝军 赵薇
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 受体,黑皮质素,4型 犬科 原核细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 550-553
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 构建犬MC4R基因的原核表达质粒,并表达重组蛋白.方法 以重组质粒pcDNA3.1-myc-his/A-cMC4R 为模板,PCR扩增MC4R基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组原核表达质粒pET-30a(+)-MC4R,转化入E.coli Transetta(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果 重组表达质粒pET-30a(+)-MC4R经双酶切鉴定证明构建正确,DNA测序证实插入序列与GenBank中登录序列的同源性为99%,只有编码区777位碱基T变成了C;表达的重组蛋白相对分子质量约为37 000,诱导4 h表达量最高,占菌体总蛋白的8%;重组蛋白可与抗His单抗特异性结合.结论 已成功构建犬MC4R基因原核表达质粒,并表达了重组蛋白,为犬MC4R蛋白多克隆及单克隆抗体的制备提供了抗原.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贺宝军	辽宁医学院实验动物中心	4	17	3.0	4.0
2	巴彩凤	辽宁医学院实验动物中心	91	369	10.0	14.0
3	王光川	辽宁医学院实验动物中心	11	30	3.0	5.0
4	宋慧娟	辽宁医学院实验动物中心	19	40	3.0	4.0
5	赵薇	辽宁医学院实验动物中心	4	15	3.0	3.0
6	吕金钢	辽宁医学院实验动物中心	4	6	2.0	2.0