小鼠角质化生长因子受体(KGFR)重组腺病毒载体的构建

• 作者: 周璇 曹春蕾 李蓓 李银平 陈力 黎檀实
• 来源期刊: 中国急救复苏与灾害医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 角质化细胞生长因子 腺病毒 小鼠 肺 受体
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 412-416
• 分类号: R34
• 字数: 4196字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-6966.2011.05.010

摘要

目的 构建表达小鼠KGFR基因的重组腺病毒.方法 提取小鼠肺组织RNA,RT-PCR获得cDNA后,PCR扩增目的 基因片段.将获得的KGFR基因插入载体质粒pShuttle-CMV,构建穿梭质粒pShuttle-CMV-KGFR(pKGFR).线性化pKGFR后,转化入含Adeasy-1病毒骨架的BJ5183细菌中.筛选正确的同源重组质粒pAdeasy-1-pShuttle-CMV-KGFR(pAd-KGFR),转染HEK293细胞,产生病毒颗粒Adeasy-1-pShuttle-CMV-KGFR(Ad-KGFR).进一步,大量扩增病毒,氯化铯梯度离心纯化,测量病毒滴度.结果 ①经限制性内切酶酶切和基因测序鉴定,证实pKGFR构建成功;②限制性内切酶酶切,确定穿梭质粒重组于病毒骨架;显微镜下观察HEK293细胞形态,证实病毒包装复制成功;③病毒滴度2.25×1010PFU/ml,达到进一步体内、体外实验要求.结论 成功构建的重组腺病毒Ad-KGFR,为了解KGFR在肺部疾病中的作用,及进一步的基因治疗肺纤维化奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈力	中国人民解放军总医院急救医学中心	48	202	8.0	12.0
2	李蓓	中国人民解放军总医院急救医学中心	34	110	6.0	8.0
3	黎檀实	中国人民解放军总医院急救医学中心	53	269	9.0	13.0
4	曹春蕾		1	0	0.0	0.0
5	周璇	中国人民解放军总医院急救医学中心	15	34	4.0	5.0
6	李银平		2	62	1.0	2.0