hsa-mir-520真核表达载体的构建及对E-钙粘蛋白表达的影响

• 作者: 刘革力 叶彬 孔璟 张潞渝 李春蕾 武卫华 高剑
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: hsa-mir-520 E-钙粘蛋白 SW-480细胞
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 967-969
• 分类号: R394-33|R735.34
• 语种: 中文

摘要

目的 构建hsa-mir-520真核表达载体,并转染大肠癌细胞SW-480细胞,检测细胞中E-钙粘蛋白表达情况.方法 依据miRBase数据库中hsa-mir-520序列,设计并合成寡核苷酸片段,构建hsa-mir-520表达载体和对照载体.采用脂质体转染方法分别将mir-520表达载体、及对照质粒转染大肠癌细胞SW-480细胞株.采用酶切、测序检测载体构建;Western blot检测E-钙粘蛋白的表达.结果 酶切和测序表明hsa-mir-520真核表达载体构建成功.Western blot结果显示与转染对照质粒和未转染的细胞相比,转染了hsa-mir-520重组质粒的细胞中E-cadherin蛋白的表达明显增加(P<0.01),密度扫描半定量分析显示E-cadherin蛋白的表达增加了大约40%.结论 成功构建了hsa-mir-520和对照的真核表达载体,hsa-mir-520质粒转染大肠癌细胞SW-480后可增加E-钙粘蛋白的表达.