羊布鲁菌外膜蛋白omp2b的克隆原核表达及纯化

• 作者: 于澜 叶伟 吴兴安 应旗康 张亮 张芳琳 张蕾 徐志凯 李凯 白文涛 程林峰
• 来源期刊: 科学技术与工程
• 学科: 医学
• 关键词: 羊布鲁菌 omp2b蛋白 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（35）
• 所属期刊栏目: 医药卫生
• 页码范围: 8705-8710
• 分类号: R378.5
• 字数: 3946字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-1815.2011.35.009

摘要

研究羊布鲁菌外膜蛋白omp2b基因的克隆,原核表达,以及纯化.根据羊布鲁菌M5株外膜蛋白omp2b蛋白基因序列设计引物,扩增出大小约为1 130 bp的目的基因片断,克隆入融合表达载体pGEX-4T-1,构建重组质粒pGEX-4T-1-omp2b.在大肠埃希菌中将该蛋白表达并用亲和层析法纯化.用Western-blot分析方法鉴定纯化蛋白.结果成功构建了pGEX-4T-1 -omp2b原核表达载体并在大肠埃希菌中表达了omp2b基因,纯化后所获得的蛋白与目的蛋白大小一致且与兔抗布鲁菌血清发生特异性反应,说明其为布鲁菌omp2b蛋白.本研究成功构建了pGEX-4T-1 -omp2b原核表达载体,并且在大肠埃希菌中进行表达,纯化的omp2b蛋白具有良好的免疫原性.