实时荧光定量RT-PCR法建立版纳微型猪近交系中厚皮创面转化生长因子表达体系

• 作者: 曾养志 李颖 潘伟荣 王继华 霍金龙
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 版纳微型猪近交系 实时荧光定量 转化生长因子 基因克隆 质粒标准品 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 页码范围: 1186-1190
• 分类号: R318
• 字数: 6126字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.07.010

摘要

背景:版纳微型猪近交系能较好的模拟人取皮区创面,构建动物模型,检测与创面愈合及瘢痕形成密切相关的转化生长因子的表达.目的:观察创面愈合过程中转化生长因子β1基因的表达情况.方法:利用版纳微型猪近交系4～6月龄猪构建了皮肤创面愈合动物模型,通过提取皮肤创面总RNA,设计特异引物,对与创面愈合相关密切的转化生长因子β1基因进行了RT-PCR扩增.纯化目的片段并与pMD18-T载体连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,并经酶切、PCR和测序鉴定,计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR.结果与结论:建立的转化生长因子β1基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法特异性较好,检测灵敏度可达103 拷贝/μL,线性范围达103～109拷贝/μL,阈值循环数与PCR体系中起始模板量的对数值之间存在良好的线性关系(R2=0.988),扩增效率高(E=107.433%).利用该检测体系检测了45份样品,效果良好,该方法可为研究TGF-β1基因在创面愈合过程中的作用机理奠定分子生物学基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	霍金龙	云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室	70	426	11.0	15.0
2	潘伟荣	云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室	24	126	7.0	11.0
3	曾养志	云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室	82	854	16.0	25.0
4	王继华	昆明医学院第二附属医院整形外科	48	189	8.0	11.0
5	李颖	昆明医学院第二附属医院整形外科	15	127	6.0	11.0