pcDNA3/BDNF真核表达载体的构建

• 作者: 刘佳 孟步亮 徐丹 李力燕 王廷华
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 脑源性神经营养因子 真核表达载体 重组质粒 克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 241-244
• 分类号: R318
• 字数: 3480字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.02.012

摘要

背景:脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)作用广泛,但属于生物大分子,不能通过血脑屏障.基因治疗是目前解决脑源性神经营养因子给药途径最有希望的方案.目的:拟构建大鼠脑源性神经营养因子基因真核表达载体.方法:采用反转录聚合酶链式反应技术从SD 大鼠脑组织提取总RNA,扩增脑源性神经营养因子基因cDNA 序列,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3 中,分别取10 g 质粒pcDNA3 和纯化的目的基因分别进行EcoR Ⅰ、xho Ⅰ双酶切.将目的基因片段和pcDNA3 载体连接,转入感受态DH5α细胞中,经酶切鉴定后送上海博亚生物技术有限公司测序.结果与结论:RT-PCR 产物为749 bp 的特异片段,重组质粒pcDNA3/BDNF 酶切后产生749 bp 和5 446 bp 的片段,DNA测序证实749 bp 片段的碱基序列与大鼠脑源性神经营养因子基因序列完全一致,成功构建了pcDNA3/BDNF 重组质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王廷华	昆明医学院神经科学研究所	307	1291	16.0	23.0
2	孟步亮	昆明医学院解剖学教研室	16	52	5.0	6.0
3	刘佳	昆明医学院神经科学研究所	32	206	7.0	13.0
4	李力燕	昆明医学院神经科学研究所	40	140	7.0	10.0
5	徐丹	昆明医学院神经科学研究所	13	41	4.0	5.0