人真核表达质粒载体pcDNA3/HA-moesin的构建及其在内皮细胞中的表达

• 作者: 刘红霞 杜静 罗卓章 郭晓华 黄巧冰
• 来源期刊: 海南医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人膜突蛋白 真核表达质粒 人脐静脉内皮细胞株
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1-4,7
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 2784字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建人膜突蛋白(moesin)的真核表达质粒pcDNA3/HA-moesin,并检测其在内皮细胞中的表达.方法:采用RT-PCR法从人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)中克隆得到moesin cDNA全长序列,经双酶切后连接到真核表达载体pcDNA/HA中,挑选出的阳性克隆经双酶切和测序鉴定后,经脂质体转染法转入HUVECs中,采用Realtime PCR及Western blot等方法检测目的基因mRNA及蛋白的表达.结果:pcDNA3/HA-moesin质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实,目的基因moesin的序列完全正确,真核表达质粒构建成功.Realtime PCR检测显示,转染pcDNA3/HA-moesin组的moesin mRNA表达水平明显高于未转染组和转染pcDNA3/HA空载体组,后2组间无明显差异.Western blot结果显示转染pcDNA3/HA-moesin组有HA-moesin蛋白表达,而未转染组和转染pcDNA3/HA空载体组未检测到HA-moesin表达.结论:成功构建pcDNA3/HA-moesin真核表达载体,在体外转染HUVECs后可使moesin mRNA表达增加,并成功表达HA-moesin,为进一步鉴定内皮细胞中晚期糖基化终产物(AGEs)引起的moesin的磷酸化位点奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗卓章	佛山市南海区第二人民医院内分泌科	7	26	3.0	5.0
2	刘红霞	佛山市南海区第二人民医院内分泌科	4	8	2.0	2.0