AQP5基因重组慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 张文杰 徐勇 徐泽宽 徐皓 杨力 沈历宗 王斌
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 水通道蛋白 SGC7901细胞 293T细胞 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2011,（42）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 17-18
• 分类号: R346
• 字数: 1693字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2011.42.008

摘要

目的 构建人水通道蛋白5(AQP5)基因慢病毒载体.方法 体外扩增出AQP5基因全长cDNA,将慢病毒载体pWPTS-GFP与扩增出的AQP5用Mlu I和Sal I进行双酶切,将AQP5全长序列克隆人pWPTS-GFP,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,对长出的克隆用菌落PCR鉴定,再对阳性克隆进行测序和比对分析.重组病毒质粒与另外两种辅助包装原件载体质粒通过CaCl2共转染293T细胞(人胚肾细胞),培养48 h后收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度,并检测慢病毒载体在工具细胞SGC7901细胞(胃癌细胞)的转染效率.Western blot检测SGC7901细胞中AQP5蛋白.结果 测序结果和Westem blot检测均证明AQP5重组慢病毒载体构建正确,并能在细胞中正确表达.与辅助质粒共转包装细胞获得慢病毒颗粒,并成功感染SGC7901细胞.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为1×108 TU/ml.结论 成功构建了稳定表达AQP5基因的重组慢病毒载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈历宗		91	635	14.0	20.0
2	徐泽宽		104	408	9.0	15.0
3	杨力		61	341	9.0	16.0
4	王斌		78	334	10.0	13.0
5	徐皓		52	280	8.0	14.0
6	徐勇		11	48	5.0	6.0
7	张文杰		1	0	0.0	0.0