乳酸乳球菌高效电转化方法的建立

• 作者: 任大勇 刘宏锋 李昌 杜寿文 洛阳 秦艳青 郭欢欢 金宁一
• 来源期刊: 中国兽药杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 乳酸乳球菌 电转化 转化效率 感受态细胞 诱导型表达载体
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 微生物与免疫
• 页码范围: 5-9
• 分类号: S852.6
• 字数: 4498字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-1280.2012.01.002

摘要

以乳酸菌诱导型表达质粒pNZ8149为载体，Lactococcus lactisNZ3900为受体，采用电转化方法研究电场强度、电击杯规格、受体菌株的生长状态、感受态细胞浓度及分装体积、质粒浓度、电击脉冲时间以及电击杯使用次数等因素对电转化效率的影响。结果表明：在固定电阻200Q、电容25μF条件下，收获对数生长前期的乳球菌制作感受态细胞，并以80μL体积分装，采用2mm规格的电击杯，加入浓度为1．2μg／μL的质粒，在电场强度和脉）中时间分别为10kV／cm和5ms的条件下完成电击转化。转化后的菌液恢复培养2h后涂板计数，转化效率最高可以达到2．6×10^4CFU／μgDNA。研究结果为进一步构建乳酸菌高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株奠定了方法基础。