人双埃克病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

• 作者: 余莹 华修国 朱彩霞 杨志彪 袁聪俐
• 来源期刊: 上海交通大学学报（农业科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人双埃克病毒 SYBR GreenⅠ 荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 页码范围: 1-7
• 分类号: Q503
• 字数: 5443字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/J.ISSN.1671-9964.2012.01.001

摘要

为建立一种能快速、简便、灵敏地检测人双埃克病毒( Human Parechovirus,HPeV)SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank发表的人双埃克病毒8个基因型的参考毒株全序列,针对5 ′端非编码区保守序列设计1对特异性引物,通过RT-PCR扩增此靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板,经过优化反应条件,建立标准曲线和融解曲线,对其灵敏性、特异性和重复性进行评价；检测临床粪便样品共156份,并与常规套式RT-PCR检测结果进行比较.结果显示,建立的标准曲线Ct值与模板浓度呈现良好的线性关系(r2=0.999),融解曲线特异,检测灵敏度可达60拷贝/μL,比常规PCR检测方法高100倍,重复性变异系数小(＜1％),能特异地检测HPeV.临床样本检测结果也表明该法(检出30份)灵敏度高于套式RT-PCR(检出21份).实验结果证明建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,有望成为HPeVs的分子诊断、流行病学调查等相关研究的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱彩霞	上海交通大学农业与生物学院	19	96	5.0	9.0
2	华修国	上海交通大学农业与生物学院	155	1291	18.0	27.0
3	袁聪俐	上海交通大学农业与生物学院	19	114	6.0	10.0
4	杨志彪	上海交通大学农业与生物学院	33	184	9.0	12.0
5	余莹	上海交通大学农业与生物学院	1	3	1.0	1.0