Ⅰ群禽腺病毒33K基因的原核表达与鉴定

• 作者: 刘加波 庞耀珊 彭宜 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文
• 来源期刊: 基因组学与应用生物学
• 学科: 生物学
• 关键词: Ⅰ群禽腺病毒 33K蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 7-12
• 分类号: Q78
• 字数: 4290字
• 语种: 中文

摘要

33K蛋白是Ⅰ群禽腺病毒（fowl adenovirus groupⅠ,FAVⅠ）的非结构蛋白,在感染的过程中起重要作用。为了构建原核表达载体pGEX-33K作为诊断抗原,本研究根据GenBank中FAVⅠ33K基因序列,设计1对特异性引物。用PCR方法扩增目的片段,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组质粒pGEX-33K。将其转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,pGEX-33K表达的分子量为36.7KD,表达产物主要以可溶性的形式存在于菌体中;最佳IPTG诱导浓度为0.75mmol/L,最佳诱导时间为4h;经Western Blot鉴定,pGEX-33K重组蛋白可与FAVⅠ阳性血清发生特异性反应,为FAVⅠ抗体ELISA鉴别诊断试剂盒的研究奠定基础。