血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的原核表达及鉴定

• 作者: 刘娜 刘青涛 李祥瑞 李银 杨婧
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 血清4型禽腺病毒 六邻体蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 页码范围: 106-110
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|S432.4
• 字数: 3335字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2018.05.015

摘要

通过原核表达的方法得到血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白;根据GenBank中血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的基因序列,设计一对特异性引物,利用普通PCR方法扩增得到hexon基因的全长序列.将PCR扩增得到的血清4型禽腺病毒六邻体基因片段,在其两端插入酶切位点后克隆至载体pMD18T中,经PCR鉴定和测序分析正确后,与原核表达载体pET-32a进行连接,构建pET-32a-hexon原核表达载体,并对其进行双酶切和测序鉴定.将构建成功的表达载体转化至BL21(DE3)中,用1 mmol/L的IPTG进行诱导表达,对得到的重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western Blot鉴定;经双酶切鉴定和测序鉴定,pET-32a-hexon原核表达载体构建成功,插入的六邻体蛋白基因片段大小为2814 bp,在1 mmol/L浓度IPTG诱导3 h时重组蛋白表达量最高,且重组蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中.SDS-PAGE分析结果显示,融合蛋白分子量为118 ku.免疫印迹分析结果显示,融合蛋白可被抗FAdV-4的血清和HIS标签抗体特异性识别;成功表达了血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白,且得到的重组蛋白具有良好的反应原性,可用于血清4型禽腺病毒的进一步研究中,为血清4型禽腺病毒病的预防和治疗奠定了良好的基础.