KSHV抗凋亡蛋白vFLIP编码基因的克隆表达及抗vFLIP多克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 卢春 朱小飞 郝婷婷 马新廷
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 病毒FLICE抑制蛋白 合成肽 多克隆抗体 卡波济肉瘤相关疱疹病毒
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1-8
• 分类号: R392.11
• 字数: 5633字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2012.01.001

摘要

目的:制备由卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的病毒FLICE抑制蛋白(viral FLICE inhibitory protein,vFLIP)的多克隆抗体,通过vFLIP重组蛋白对该抗体特异性进行鉴定,并将此抗体初步应用于天然病毒vFLIP蛋白表达的检测.方法:对vFLIP蛋白抗原表位进行预测分析,设计并合成3条多肽,将合成肽与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联作为抗原,免疫新西兰白兔,制备抗vFLIP的多抗;以pCDH-vFLIP质粒为模板扩增vFLIP片段,插入到真核表达载体pEF-MCS-Flag-IRES/Puro中,构建pEF-vFLIP表达载体,利用脂质体将其转染HEK293T细胞,并在其中表达vFLIP.采用ELISA、蛋白质印迹法鉴定vFLIP多克隆抗体的效价及特异性,将该抗体用于天然病毒vFLIP的检测.结果:经限制性内切酶鉴定和核酸序列测定证实成功构建了重组质粒pEF-vFLIP,Flag抗体可以特异性识别该质粒在HEK293T和EA.hy926细胞内表达的vFLIP-flag融合蛋白.进一步的ELISA结果显示,制备的兔抗vFLIP多克隆抗体效价为1:11 000以上.该抗体不但与HEK293T和EA.hy926细胞内表达的重组vFLIP-flag融合蛋白反应,而且能够特异性识别PEL细胞中天然的病毒vFLIP蛋白.结论:构建了含vFLIP基因的重组真核表达载体;采用人工合成肽作为半抗原制备的抗KSHV vFLIP多抗,可以成功地检测重组vFLIP蛋白和天然病毒蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢春	南京医科大学微生物学与免疫学系	92	236	7.0	9.0
2	朱小飞	南京医科大学微生物学与免疫学系	4	2	1.0	1.0
3	马新廷	南京医科大学微生物学与免疫学系	2	2	1.0	1.0
4	郝婷婷	南京医科大学微生物学与免疫学系	3	2	1.0	1.0