猪传染性胃肠炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 何雷 刘伟 张彦明 林鸷 程敏 董玲娟
• 来源期刊: 西北农林科技大学学报：自然科学版
• 学科: 农学
• 关键词: 猪传染性胃肠炎病毒 荧光定量RT-PCR 质粒标准品
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 动物医学
• 页码范围: 13-19
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

【目的】建立一种能检测猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）含量的荧光定量RT-PCR方法,为猪传染性胃肠炎（TGE）的诊断和防治提供技术支持。【方法】根据TGEV TH98株的N基因序列设计1对特异性引物,扩增出目的片段,连接克隆载体后构建质粒标准品;对荧光定量的循环条件进行优化,建立猪传染性胃肠炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法,对其重复性、特异性进行检测,并与普通PCR检测方法进行比较,最后应用该方法对采自陕西杨凌周边的30份临床样品进行检测。【结果】成功构建了质粒标准品,建立了检测猪传染性胃肠炎病毒的荧光定量RT-PCR方法,该方法特异性高、重复性好、敏感性比普通PCR检测方法高2个数量级,对质粒标准品的线性检测范围为1.0×107～1.0×101拷贝/μL。用建立的检测方法对从陕西杨凌周边猪场采集的30份样品进行检测,检出4份阳性,与普通PCR检测方法符合率为100%。【结论】建立的TGEV荧光定量RT-PCR方法敏感性高、特异性好、省时省力,可以对猪传染性胃肠炎病毒进行快速检测。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘伟		47	207	9.0	12.0
2	张彦明		256	1530	16.0	24.0
3	程敏		6	3	1.0	1.0
4	何雷		5	6	2.0	2.0
5	董玲娟		2	0	0.0	0.0
6	林鸷		5	17	3.0	4.0