共表达猪细小病毒VP2蛋白和猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其鉴定

• 作者: 云涛 仇华吉 余斌 叶伟成 孙元 崔尚金 崔言顺 张存 张帅 李军星 邓晓辉 陈柳
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: PRV感染性克隆 细菌人工染色体 猪细小病毒 猪圆环病毒2型
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 251-256
• 分类号: S852.65
• 字数: 4043字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.2012.04.01

摘要

为研制猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)3联苗,本研究将PPV VP2基因和PCV2 Cap基因通过口蹄疫病毒2A基因串联得到VP2-2A-Cap (V2C)基因,将其插入pEP-CMV-in转移载体构建pEP-V2C-in重组表达质粒,再通过Red/ET两步重组法在大肠杆菌中构建了pPRV-V2C-△gE和pPRV-△gE突变体,该突变体用磷酸钙法转染BHK-21细胞获得重组病毒rPRV-V2C-△gE和rPRV-△gE.Western blot分析表明rPRV-V2C-△gE能够在BHK-21细胞内表达融合蛋白VP2-2A-Cap,而且目的蛋白能够被2A蛋白裂解为64ku和28 ku两个片段.重组病毒生长曲线和噬斑大小测定结果显示rPRV-V2C- △gE在BHK-21细胞中的增殖滴度与亲本株rPRV无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV的增殖.本研究为PRV、PPV和PCV2 3联重组活载体疫苗的研制奠定了基础.