山东鹅观草SSR-PCR反应体系的优化和验证

• 作者: 严学兵 刘全兰 刘彬彬 彭程 王洪光 田纪春
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 山东鹅观草 SSR-PCR 优化 验证
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 91-94
• 分类号: Q945.79
• 字数: 3972字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2012.02.091

摘要

山东鹅观草是一重要的小麦野生近缘种质资源,具有对黄矮病的高抗性和易于小麦杂交的高亲和性等优良性状.以CTAB法提取山东鹅观草叶片DNA为模板,进行反应PCR体系优化.选用20 μL的PCR 反应,对Mg2+浓度、dNTP浓度、引物、DNA模板和Taq酶5个因素设计5个水平进行体系优化和验证试验.先以1个SSR标记(Xgwm43-7B )对5个因素进行筛选.为了验证所选最优体系的稳定性,再选用9个SSR标记(Xgwm18-1B、Xgwm32-3A、Xgwm6-4B、Xgwm60-7A、Xgwm67-5B、Xgwm77-3B、Xgwm88-6B、Xgwm95-2A和Xgwm99-1A)进行验证性试验.单因素试验结果表明PCR反应最佳体系为:20 μL 反应体系,2μL的 10×PCR Buffer,2.875mmol/L 的Mg2+,200μmol/L 的dNTP,3 pmol的引物,45 ng的模板DNA,1.5 U的 Taq 聚合酶,双蒸水以补足20 μL反应体系.验证性试验结果表明该反应体系有一定通用性,但扩增效果及PCR产量有差异.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田纪春	山东农业大学作物生物学国家重点实验室小麦品质育种室	124	2638	26.0	47.0
2	严学兵	河南农业大学牧医工程学院	70	1116	21.0	30.0
3	王洪光	青岛科技大学化工学院	51	207	8.0	11.0
4	刘全兰	青岛科技大学化工学院	16	61	4.0	7.0
5	刘彬彬	山东农业大学作物生物学国家重点实验室小麦品质育种室	11	59	2.0	7.0
6	彭程	青岛科技大学化工学院	2	3	1.0	1.0