微小隐孢子虫P23基因在毕赤酵母中的表达及初步应用

• 作者: 周鹏 曹薇 杨晓娇 王向佩 王晓娟 石凯 米荣升 陈兆国 黄燕
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 微小隐孢子虫 P23基因 巴斯德毕赤酵母 真核表达
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 56-62
• 页数: 7页
• 分类号: S852.723
• 字数: 3334字
• 语种: 中文

摘要

为将微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）P23基因在巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）系统中进行表达,利用表达蛋白初步建立隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,设计引物从微小隐孢子虫基因组DNA中扩增P23基因序列,构建pPIC9K-P23重组质粒,在毕赤酵母中进行表达,用阴离子交换层析柱进行纯化。以重组P23纯化蛋白为抗原建立间接ELISA检测方法,对现场采集的猪血清样品进行检测。SDS-PAGE显示所表达的蛋白大小约为23 kDa。Western blot检测表明该蛋白能与兔抗P23蛋白血清特异性结合。用建立的间接ELISA技术对186份猪血清样品进行检测,阳性率为83.3%。本研究获得了真核表达的P23重组蛋白,初步建立了微小隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,为隐孢子虫病的诊断和流行病学调查打下了基础。