杆状病毒表达EV71病毒样颗粒的装配、制备纯化与鉴定

• 作者: 伊瑶 孟庆玲 宋敬东 曹蕾 毕胜利 田瑞光 田苗苗 贾志远 邱丰
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 杆状病毒 肠道病毒71型(EV71) 病毒样颗粒(VLPs) 制备 鉴定 纯化
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 201-206
• 页数: 6页
• 分类号: R373.2
• 语种: 中文

摘要

将EV71P1和3CD基因片段克隆人同一杆状病毒穿梭质粒Bacmid中,构建出重组杆状病毒表达质粒Bacmid-P1-3CD;脂质体介导其转染Sf9昆虫细胞获得共表达P1和3CD的重组杆状病毒(AcMNPV-P1-3CD).用IFA和Western-blot法对表达产物进行鉴定和分析.电镜结果显示P1经3CD切割装配成了大小约为27nm的类球形颗粒(即EV71VLPs).进一步分析影响杆状病毒表达系统的因素以对表达条件进行优化,结果显示MOI值和时间均可影响目的蛋白的表达,其中时间是主要因素.选择优化后条件利用无血清培养基对贴壁Sf9细胞在多层细胞培养器中进行VLPs的大量表达,密度梯度离心法纯化,SDS-PAGE结果可见三条大小约为39kD、34kD和26kD的VP1、VP0和VP3特异性条带.纯化后EV71VLPs颗粒结构完好,为下一步EV71蛋白结构的基础研究和基因工程疫苗的研究奠定了基础.