293-siDrosha稳定细胞系模型的建立及microRNA相关功能的检测

• 作者: 刘力 郭蓉
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: siDrosha microRNAs 293细胞
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 381-385
• 分类号: R113
• 字数: 3046字
• 语种: 中文

摘要

目的 利用RNAi实验方法构建293-siDrosha稳定细胞系,并探讨该稳定细胞系在microRNAs功能研究中的应用.方法 将质粒pSicoR-human Drosha1转人人胚肾293细胞,用G418筛选2～3周后,获得293-siDrosha#3稳定细胞系,并用RT-PCR、Western blot、real-time PCR等方法检测293-siDrosha#3稳定细胞系中Drosha基因mRNA和蛋白质表达情况.并用poly(A)实时定量RT-PCR法检测野生293细胞,Mix细胞(未克隆的293-siDrosha细胞),293-siDrosha#3细胞(克隆的293-siDrosha细胞)中内源hsa-miR-491-5p的表达情况.结果 构建了293-siDrosha#3 稳定细胞系,与对照组相比,293-siDrosha#3细胞中Drosha基因的mRNA和蛋白质表达水平均显著下降.检测内源性hsa-miR-491-5p在对照组和293-siDrosha#3细胞中表达,结果表明对照组细胞中表达的hsa-miR-491-5p是293-siDrosha#3细胞的近120倍.结论 成功构建了293-siDrosha稳定细胞系,并且证明此稳定细胞系可以作为研究一些microRNAs相关功能的模式细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘力	中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原生物学系	13	30	3.0	4.0
2	郭蓉	中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原生物学系	2	2	1.0	1.0