重组人p66Shc/腺病毒表达载体的构建与表达

• 作者: 孙洪范 徐蓉 林雅军 柳江 程建华 胡刚 许晓东 魏洁
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: p66Shc 腺病毒 同源重组 脐静脉内皮细胞
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 320-325
• 页数: 6页
• 分类号: Q782
• 字数: 4154字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2012.h5.002

摘要

目的 构建人p66Shc/腺病毒表达载体,观察其在内皮细胞中的表达.方法 扩增p66Shc基因并与腺病毒骨架载体进行体外重组连接,经筛选、测序确认后转染进HEK293A细胞进行包装,10 d后收集细胞裂解液感染HEK293A细胞和脐静脉内皮细胞,48 h后分别用Western印迹和免疫荧光细胞化学法检测p66Shc蛋白表达水平.结果 经测序确认目的基因p66Shc成功克隆入腺病毒载体中,转染HEK293A细胞后可在显微镜下观察到特征性的细胞病变效应,Western印迹检测和免疫荧光细胞化学法检测均表明感染了AdenoX-p66的HEK293A细胞和内皮细胞中p66Shc蛋白表达水平显著升高.结论 人p66Shc/腺病毒表达载体构建成功并能在内皮细胞中表达.