PML coiled-coil结构域与RAN结合蛋白9相互作用的验证

• 作者: 刘北忠 初晨 吴秀娟 朱丹 王翀 钟梁 高艳军 黎亮
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白血病 蛋白质相互作用 酵母双杂交系统 免疫共沉淀
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 分类号: R733.71
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2012.01.001

摘要

目的 验证前髓细胞性白血病的卷曲螺旋结构域(PML-C)和RAN结合蛋白9(RANBP9)之间的相互作用.方法 构建分别表达诱饵蛋白PML-C和靶蛋白RANBP9的载体pGBKT7-PML-C和pACT2-RANBP9,然后转入酵母AH109,培养3～5 d后对其是否有胞内相互作用进行检测.将目的 片断PML-C和RANBP9再次构建于真核生物表达载体pCMV-HA和pCMV-myc里,然后共转染人胚肾293细胞里(HEK293),最后对其是否有体外相互作用通过免疫共沉淀和免疫印迹进行分析.结果 在共转化了质粒pGBKT7-PML-C和pACT2-RANBP9的AH109酵母平板里观察到蓝色菌落生长.用抗HA多克隆抗体对共转染过重组质粒的HEK293细胞的蛋白提取物进行免疫共沉淀,再用抗myc单克隆抗体作为一抗进行免疫印迹,最终检测出融合蛋白myc-RANBP9条带.结论 酵母双杂交实验验证了PML-C和RANBP9之间存在胞内相互作用,同时免疫共沉淀实验也从体外验证了它们之间的相互作用.